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细胞介绍 该品系由 Kathryn A. Wikenheiser 于 1992 年在人类表面活性蛋白 C 基因启动子区控制下的 SV40 大 T 抗原转基因小鼠中建立。细胞在 6 到 9 个月裸鼠内产生肿瘤,肺表面活性蛋白 B、C (SP-B、SP-C),细胞表达大 T 抗原的 mRNA。 检测到肺表面活性蛋白 B 和 C。细胞分泌磷脂以响应佛波酯和 ATP,但不响应毛喉素。 细胞特性 1) 来源:小鼠正常肺组织 2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长 3) 含量:>1x106 细胞数 4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装 5) 用途:仅供科研使用。 运输和保存 干冰运输及复苏好存活细胞 (1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。 (2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 细胞接收后的处理 1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。 2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。 3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。 4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。 细胞培养步骤 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备DMEM/F12基础培养基 94% 优质胎牛血清 2% GlutaMAX-1谷氨酰胺 1% HEPES 1M Buffer solution 1% P/S青霉素-链霉素 1% ITS(胰岛素+转铁蛋白+硒) 1% 氢化可的松 10nM 雌二醇 10nM 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
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