解纤维素根瘤菌的形态特征与主要价值及培养方法！
小杨 / 2024-05-29 09:27:53
解纤维素根瘤菌是Rhizobium属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究；教学。
一、菌种简介
规格：冻干物
拉丁属名：Rhizobium Cellulosilyticum
收藏时间：2013/1/28
原始编号：F5-1
原产国：中国
资源归类编码：15131137101
模式菌株：非模式菌株
主要用途：分类；研究；教学
特征特性：菌体呈杆状，分散排列，菌落为圆形，直径约2-3mm,黄色，不透明，表面光滑，边缘整齐。细菌无荚膜，无芽孢，革兰氏染色为阴性。细菌通过裂殖进行繁殖。该细菌为异养型细菌，在生长过程中需要氧气，不需要阳光，氧化酶反应为阴性。该细菌的最适生长温度为30℃左右，最适环境pH为7.0左右。该细菌在生长过程中不需要添加生长因子和其他营养物质。
生物危害程度：四类
分离基物：土壤
采集地：北极
培养温度：18℃
用途：研究
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
二、形态特征
解纤维素根瘤菌，菌体呈杆状，分散排列，菌落为圆形，直径约2-3mm,黄色，不透明，表面光滑，边缘整齐。细菌无荚膜，无芽孢，革兰氏染色为阴性。细菌通过裂殖进行繁殖。该细菌为异养型细菌，在生长过程中需要氧气，不需要阳光，氧化酶反应为阴性。该细菌的最适生长温度为30℃左右，最适环境pH为7.0左右。该细菌在生长过程中不需要添加生长因子和其他营养物质。
三、培养方法
1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。
2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。
3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。
4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。
5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。
6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。
四、实验内容
1、称量→溶化→调ph→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查
2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物
3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查
4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌
五、使用范围
（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。
（2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。
（3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。
六、保存方法
1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。
2、悬液保存法：
①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。
②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。
3、载体保存法：土壤保存法；砂土保存法；硅胶保存法；磁珠保存法；麸皮保存法；纸片(滤纸)保存法。
4、常用的冷冻保存法：
①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。
③液氮保存法(-196℃)：是适用范围最广的微生物保存法。
七、注意事项
1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 2 支斜面上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；
2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；
3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；
4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；
5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和
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